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如何延長UPLC柱壽命

關(guān)于流動相

• 選擇優(yōu)質(zhì)的色譜級流動相溶劑；
• 確保使用超純水，純化水系統(tǒng)應(yīng)始終處于良好的工作狀態(tài)；
• 通道中避免使用100%水相，如含有5-10%有機(jī)相就可顯著抑菌； 如果必須使用100%水相，則每24-48小時必須新鮮配制、* 更換(含溶劑瓶)；
• 對流動相水溶液部分使用0.2 µm過濾膜過濾(推薦使用：沃特世P/N:186003524 0.2 µm 47 mm GHP膜)。

關(guān)于樣品制備

• 樣品溶液中的微粒會堵塞系統(tǒng)管路或色譜柱，可使用高速離心

和/或用0.2 µm過濾膜過濾樣品，確保濾膜與樣品溶液兼容(推薦使用：沃特世 P/N: WAT097962，針式過濾膜GHP；或垂詢我們)；

• 確保樣品與流動相體系兼容，進(jìn)樣后不會發(fā)生沉淀；
• 較臟的樣品，容易造成色譜柱污染，使用適合的固相萃取小柱對樣品進(jìn)行凈化處理。

清洗與再生

親水作用色譜柱操作建議

(CORTECS HILIC、BEH HILIC、BEH Amide)

親水作用色譜柱的使用方法與反相色譜柱有很大的不同，需要加以

注意。(關(guān)于HILIC，請訪問waters.con/hilic，并參考《HILIC   綜合指南》，715002531ZH)。

樣品制備

• 應(yīng)盡可能使用較高比例的有機(jī)溶劑(如95%乙腈)，以避免溶劑效應(yīng)。如果存在樣品溶解問題，應(yīng)至少使用50/50乙腈/水，并減少進(jìn)樣體積。

柱平衡

• 初次使用時，先用50倍柱體積的50/50乙腈/水(CORTECS HILIC， BEH HILIC，如果流動相條件含有緩沖鹽則需添加10 mM流動相緩沖鹽)或60/40乙腈/水(BEH Amide)對柱進(jìn)行老化；
• 開始進(jìn)樣前，用20倍柱體積的起始流動相條件進(jìn)行平衡；
• 如果使用梯度條件，每次梯度之間，用8-10倍柱體積的起始流動相條件再次平衡。
• 沒有充分老化平衡的色譜柱，將會出現(xiàn)柱效較低、以及保留時間漂移的問題。

柱清洗再生

• 對于ACQUITY UPLC BEH HILIC與CORTECS HILIC色譜柱，用

50/50乙腈/水清洗以去除極性污染物。如果不能解決問題，用5/95

的乙腈/水沖洗；

• 對于ACQUITY UPLC Amide色譜柱，可采用10分鐘的梯度洗脫從100%有機(jī)相到100%水相。值得注意的是當(dāng)水相比例升高，壓力將迅速增加，當(dāng)水相比例超過60%時需降低流速。如果有必要可重復(fù)清洗。

柱保存

• 先將緩沖鹽從色譜柱內(nèi)沖洗干凈，然后將色譜柱保存在95/5乙腈/水(BEH HILIC，CORTECS HILIC)或100%乙腈(BEH Amide)中。

過濾膜

沃特世建議您使用0.2 µm的過濾膜對緩沖溶液和樣品進(jìn)行過濾， 以避免顆粒物質(zhì)堵塞色譜柱和儀器部件。

UPLC柱配件

UPLC柱的連接

ACQUITY UPLC系統(tǒng)使用專門設(shè)計的可耐受高壓并且有

小柱外體積的管路和接頭。*的色譜柱進(jìn)口管路(訂貨號430001084)是隨ACQUITY     UPLC色譜系統(tǒng)配的，進(jìn)樣閥末端的管路清晰地用藍(lán)色標(biāo)記標(biāo)示出來，將這根管路的另一端插入UPLC色譜柱的入口端并用5/16英寸的扳手?jǐn)Q緊。關(guān)于ACQUITY   UPLC色譜柱正確的出口管路，請參考ACQUITY UPLC系統(tǒng)操作手冊的相關(guān)檢測器部分(訂貨號71500082502)。